【摘要】:目的探讨氧合酶家族分子(TET)在叶酸缺乏条件下对人神经母细胞瘤细胞系SH-SYSYIMR32细胞的增殖能力及淀粉样前体蛋白(APP)基因早老素1(PSl)基因以及G位淀粉样前体裂解酶-1(BACEl)基因表达的影响及机制方法体外培养SHSY5YIMR-32细胞,分为叶酸缺乏组低剂量组正常对照组,采用噻唑蓝(MTT)法观察细胞增殖实时荧光定量PCR(RTPCR)检测细胞中APPPSlBACElTETs甲基转移酶(DNMTs)基因mRNA的表达;构建TETl低表达稳转细胞株,采用荧光倒置显微镜观察荧光蛋白,MTT法观察细胞增殖,RTPCR检测细胞中TETlAPPPSlBACEl的转录水平结果(1)在叶酸缺乏组及低剂量组,培养120h和144h后SH-SYSYIMR32细胞增殖能力明显降低(均P<0.001);SH-SYSY细胞中APPPSlBACElDNMTlDNMT3aDNMT3bTETlTET2TET3的mRNA水平升高(F-80.31535.386101.979786.40780.331131.54528.0009.165102.167,均P<0.05),IMR-32细胞中APPPSlBACElDNMTlDNMT3bTETlTET2TET3的mRNA水平升高(F-12.28393.66940.815157.23424.835147.59454.79473.068,均P%0.05)(2)构建TETl低表达稳转细胞株,低表达组(SHSY5YshTETl)细胞内TETl的相对表达量分别为0.25±0.02,低于阴性对照组1.004-_0.09(P=0.007);低表达组(IMR-32-shTETl)细胞内TETl的相对表达量分别为0.28±0.07,低于阴性对照组1.00±0.01(P-0.003)(3)相较于阴性对照组,低表达组(SH-SY5Y-shTETlIMR-32-shTETl)的增殖能力均增加(均P<0.01);且细胞内APPBACEl的tuRNA水平降低(P<i0.01或P<0.05)结论在人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5YIMR32中,叶酸缺乏上调TETs的表达,通过TET蛋白去甲基化途径增加细胞中APPBACEl表达,并抑制细胞生长
   
   【关键词】:叶酸;DNA甲基转移酶;氧合酶;淀粉样蛋白;口位淀粉样前体裂解酶
   
   讨论
   AD病因复杂,并不完全复合孟德尔遗传定律,虽然在家族性AD中发现了致病基因,但家族性AD仅占5%,超过90%以上的为散发性,说明基因以外的表观遗传机制和环境致病因子更为重要,表观遗传机制其最主要机制为DNA甲基化,其可以调节基因的表达和静默DNA甲基化是指胞嘧啶C由DNA甲基转移酶的催化变为5mC的过程;而DNA去甲基化是指5mC被胞嘧啶代替的过程,TET蛋白通过将5mC氧化参与DNA去甲基化的途径TET氧合酶家族的去甲基化作用与甲基转移酶DNMTs的甲基化作用共同构成了DNA甲基化的可逆机制,实现了DNA甲基化状态的动态平衡本实验发现,缺叶酸条件下细胞中DNMTs表达增加,细胞增殖能力下降低叶酸水平下,全基因组处于低甲基化状态,而DNMTs表达上调,说明除参与甲基化外,DNMTs的表达可能与其他机制有关近年研究结果表明,DNMTs以-种非甲基化依赖机制直接参与DNA损伤,即在叶酸缺乏的环境中,DNA损伤增多,上调DNMTs的表达研究结果表明,TET分子调控神经干细胞中众多参与DNA复制和细胞周期相关基因的表达TETl的活性改变直接导致了DNA损伤并影响细胞周期,最终引发细胞凋亡类似的研究也发现,TETl表达增强通过抑制p53基因并使细胞周期停滞于G1期,抑制细胞生长本实验发现,缺叶酸条件下,细胞活力下降,TETl的表达显著升高;TETl低表达后,细胞活力明显增加上述结果提示,叶酸缺乏可通过上调TETI的表达导致细胞增殖能力下降
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