[摘要]:目的构建shRNA-PAX6慢病毒载体并观察其对胶质瘤U251细胞增殖的影响。方法根据文献报道的PAX6靶点序列,设计两条PAX6基因的siRNA靶点干扰序列,引物退火形成带粘性末端的双链,与经BamHI、EcoRI双酶切后线性化的慢病毒载体进行连接、转化,构建shRNA-PAX6慢病毒重组载体,再经菌落PCR及测序鉴定重组载体;在293T细胞中包装病毒,将包装后的shRNA-PAX6慢病毒重组载体感染U251细胞。结论成功构建人PAX6基因的shRNA-PAX6慢病毒重组载体,沉默PAX6基因的表达,U251细胞的增殖能力增强。
   
   [关键词]:PAX6基因;胶质瘤细胞;细胞增殖;RNA干扰;慢病毒载体
   
   3讨论
   转录因子PAX6是PAX基因家族重要成员之一,该基因可通过激活或抑制下游靶基因的启动子、增强子等的转录活性从而调节靶基因的转录,在不同类型癌症的生长、侵袭和血管生成中可能发挥致癌或抑癌作用。研究报道,PAX6高表达于胰腺癌组织,其表达水平与该肿瘤的恶性程度呈正相关,抑制PAX6的表达可能通过活化酪氨酸激酶受体作用促进胰腺癌细胞凋亡、细胞生长能力降低;乳腺癌组织中PAX6表达水平的高低与其预后相关。
   抑制PAX6的表达,可通过增加Bcl-2、CDK1和PCNA的表达,降低BAX和p21的表达,减少细胞凋亡从而促进人视网膜母细胞瘤细胞增殖,但另有研究报道,靶向沉默PAX6表达也可能通过调控PI3K/AKT信号通路而抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖和侵袭;PAX6高表达于非小细胞肺癌A549、H1299细胞,抑制PAX6的表达,通过抑制MAPK信号通路从而抑制癌细胞增殖及细胞周期进程,过表达PAX6则可通过ERK和MAPK信号通路促进A549细胞的增殖和侵袭;在前列腺癌组织和细胞中PAX6的表达水平低于正常上皮细胞,过表达PAX6抑制前列腺癌细胞的增殖和克隆形成。