[摘要]目的 构建 CD19特异性人工抗原提呈细胞(aAPC)用于体外激活扩增CDl9嵌合抗原受体(CAR)修饰T细胞(CD19-CAR-T),并考察其杀伤效应。方法通过慢病毒介导的方法制备以NIH3T3为细胞骨架结论成功制备CD19特异性aAPC,其可在体外特异性扩增功能性CD19-CAR-T细胞,为初步建立制备高质量临床级CD19-CART细胞的方法提供了技术支撑。
   
   [关键词]人工抗原提呈细胞;CD19;嵌合抗原受体修饰T细胞;增殖;杀伤
   
   3讨论
   目前在血液肿瘤治疗中CAR-T细胞疗法显示前所未有的治疗效果,KitePharma公司最近报道CDl9-CAR-T治疗难治性弥散性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的临床试验中,客观应答率(OR)完全应答率(CR)分另0为71%和57%部分患者CR持续1年以上。为获得最佳的CAR-T治疗效果,制备获得临床级高质量CDl9-CAR-T细胞是关键环节之一。最近研究发现,采用aAPC能快速激活和扩增特异性T细胞。Zeng等向K562细胞中转染MART-1、CD70、CD80和成CDl37L,构建MART-1特异性aAPC,其中表达全部外源性分子的aaPcft能最高效地刺激MART-1特异性T细胞的增殖。为建立aAPC扩增CAR.T细胞的技术平台,我们初始采用较易转染的NIH3T3细胞为骨架,构建了同时表达CDl9、CD86和威CDl37L的aAPC:Nm3T3-CDl9/86(aAPC-B)、NIH3T3-CDl9/86/137L(aAPC-A)。研究发现,额外表达CDl37L的aAPC具有更好的扩增效果:体外经2轮扩增后,aAPC-A和aAPC-B分别使CDl9-CAR-T细胞数量增加40倍和160倍左右;前者扩增的细胞CDl9CAR表达增加目.对靶细胞的杀伤作用明显增强;更重要的是,aAPC-A扩增的CAR-T细胞含有约20%左右Tcm细胞,提示经aAPC-A扩增的终末细胞产物可能具有较好的体内抗肿瘤特性。