【摘要】目的:通过Transwell小室基质侵袭和划痕损伤方法研究宫颈癌Caski细胞系侵袭和迁移能力,观察其与槲皮素、乙酰肝素酶(HPA)的关系。方法:根据GenBank数据库提供的人HPA基因核苷酸序列,按照小发夹RNA(ShRNA)设计原则设计4对特异性的寡核苷酸序列及阴性对照,分别克隆到pYr-1.1质粒载体中。将筛选出的质粒转染到宫颈癌Caski细胞中,并将Caski细胞分为Caski细胞组、Caski+槲皮素组、HPA-ShRNA-Caski组(HPA蛋白基因沉默的宫颈癌Caski细胞)和HPA-ShRNA-Caski+槲皮素组。然后进行Transwell小室基质侵袭和划痕损伤实验,观察不同时间宫颈癌细胞的侵袭和迁移能力。结果:①在6、12、24小时时,Caski+槲皮素组和HPA.ShRNA-Caski组划痕宽度明显大于Caski细胞组(P<0.05;P<0.01);HPA-ShRNA-Caski+槲皮素组划痕宽度均大于其他3组(P<0.01)。@Caski+槲皮素组和HPA-ShRNA-Caski组有细胞侵袭能力的细胞数较Caski细胞组下降(P<0.05),HPA.ShRNA-Caski+槲皮素组较其他3组均明显下降(P<0.01)。结论:槲皮素对宫颈癌Caski细胞的侵袭和迁移能力有明显抑制作用,而HPA与宫颈癌细胞的侵袭、迁移过程有关。槲皮素对宫颈癌的侵袭和迁移能力的抑制作用可能与HPA相关。
   
   【关键词】宫颈癌;槲皮素;乙酰肝素酶,侵袭;迁移
   
   
   3讨论
   宫颈癌是妇女常见恶性肿瘤之一,病死率较高,其主要原因是肿瘤的高生长性、高复发性及高转移性。因此,如何抑制肿瘤生长、复发和转移,降低病死率,延长患者的无病生存期,提高其生活质量是治疗的目的。但是目前抗肿瘤药物毒副反应较大,疗效有限。
   1999年,Vlodavsky等成功进行了HPA的纯化,并克隆出HPA基因。HPA在多种恶性肿瘤如乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌等中高表达。HPA蛋白含量与肿瘤恶性程度、生长速度、转移潜能呈正相关,在良性肿瘤低水平表达,正常组织则不表达。HPA具有促进肿瘤细胞转移的作用。研究发现,通过载体将HPA基因导入到低或无转移潜能的小鼠Eb细胞瘤细胞系和黑色素瘤细胞系,形成HPA的稳定高表达,这些肿瘤细胞获得了高转移潜能,接种到裸鼠肝脏后,转移能力及致死能力均明显升高。这说明HPA基因可以使肿瘤细胞从低转移潜能转变为高转移潜能;但是具有高转移潜能的肿瘤细胞应用HPA抑制剂后,肿瘤细胞转移明显受抑制,转移的部位和数量均明显减少。