摘要:目的观察钙敏感受体(CaSR)在癫痫大鼠发作中的表达和凋亡通路的变化。方法采用连续28d亚惊厥剂量的戊四氮pentetrazole(PTZ 35mg/kg)腹腔注射制备大鼠癫痫模型。Wistar大鼠随机分为2组:正常对照组(control group);癫痫组(epilepsy group),癫痫模型组用P1z(35mg/kg)腹腔注射,每天1次。采用Westernblotting分别观察CaSR、Bax、Bel-2和caspase-3的蛋白表达;TUNEL染色观察海马神经元凋亡情况;光镜观察海马神经元尼氏染色形态学结构变化;紫外分光法检测髓过氧化物酶(MPO)和黄嘌呤氧化酶(XOD)。结果与正常组比较,癫痫组XOD、MPO的含量明显增高,细胞凋亡指数以及CaSR、Bax和caspase-3的表达均达高峰,同时Bcl-2表达减少,海马神经元超微结构损伤严重。结论CaSR表达增多可能参与了大鼠癫痫的发生,氧化应激和凋亡可能参与癫痫的发生。
   
   关键词:钙敏感受体;大鼠;癫痫;细胞凋亡;戊四氮
   
   
   3讨论
   癫痫是一种常见的以反复突然发作的意识丧失伴抽搐为主要症状的慢性神经系统疾病,全世界有超过五千万的癫痫患者。但由于对癫痫认识的局限性,癫痫的病因和发病机制尚不完全清楚。点燃模型为目前应用最广泛的癫痫模型,特别是其发病机制被认为与人类癫痫的发病机制相似。PTZ点燃不仅可进行性提高发作易感性,还可引起脑功能改变,现被公认为难治性癫痫的理想模型。鉴此,本实验采用连续腹腔注射PTZ的方法复制癫痫模型。结果显示:模型组有连续多次的Ⅲ~V级癫痫发作,根据文献报道的标准可以认为实验动物均达到点燃标准,癫痫模型制备成功。
   采用Westernblotting技术,本文观察到模型组脑组织CaSR蛋白表达明显增多,它提示脑组织CaSR的表达增加参与了癫痫的发生。我们在癫痫的海马神经元模型中,运用CaSR激动剂和阻断剂,进一步证实CaSR的表达增加通过激活凋亡信号通路促进海马神经元凋亡的发生(另文发表)。本文还观察到模型组血清中XOD和MPO含量升高,这表明氧化应激是癫痫所致脑损伤的内在机制之一。我们前期研究已证明,细胞外钙增加及其它CaSR激动剂(Gd3+、精胺等)可通过G蛋白PLC-IP3信号转导途径,引起肌浆网内钙释放增加,导致细胞内游离钙增多,发生细胞内钙超载。