摘要:目的 探讨 金钗石斛多糖对脑缺血-再灌注大鼠核因子κB (NF-κB)信号通路的调控机制. 方法 将90只SD大鼠按随机数字表法随机分为6组,分别为假手术组、模型组和金钗石斛多糖低剂量组(DL,50 mg/kg)、中剂量组(DM,100 mg/kg)、高剂量组(DH,200 mg/kg)以及尼莫地平组(10 mg/kg),每组15只,再按随机数字表法每组随机取5只供相应指标检测.采用大脑中动脉阻塞法建立SD大鼠局灶性脑缺血-再灌注模型,观察金钗石斛多糖对大鼠神经功能缺损(Bederson行为学评分)、脑含水量和脑梗死体积的改善作用.采用酶联免疫吸附法检测脑组织促炎因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平,采用实时荧光定量多聚酶链反应(RT-qPCR)检测小胶质细胞标记物BCL-2相关蛋白A1α(A1)和星形胶质细胞标记物胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP) mRNA转录水平,蛋白免疫印迹法检测NF-κB信号通路磷酸化抑制蛋白(IκBα)和胞核p65蛋白的表达水平.多组间计量资料比较采用单因素方差分析. 结果 (1)6组间大鼠神经功能缺损评分、脑含水量、脑梗死体积、脑组织TNF-α和IL-1β水平、A1和GFAP mRNA转录水平以及磷酸化IκBα蛋白和胞核p65蛋白水平差异均有统计学意义(F值分别为22.24、8.699、33.89、19.26、27.53、109.5、15.28、66.86、41.63,均P<0.01).(2)模型组大鼠神经功能缺损评分、脑含水量、脑梗死体积分别为(2.8±0.3)分、(86.1±3.8)%、(31.0±4.5)%,均明显高于假手术组(均P<0.01);脑组织TNF-α和IL-1β水平、A1和GFAP mRNA转录水平以及磷酸化IκBα蛋白和胞核p65蛋白水平较假手术组均明显增高,差异均有统计学意义(均P<0.01).(3)DH组前三项分别为(1.5±0.5)分、(72.9±5.4)%、(17.5±4.1)%,与模型组比较(包括脑组织TNF-α和IL-1β水平、A1和GFAP mRNA转录水平以及磷酸化IκBα蛋白和胞核p65蛋白水平),差异均有统计学意义(均P<0.05);与尼莫地平组比较,各指标差异均无统计学意义(均P>0.05);与假手术组比较,除脑含水量、IκBα、胞核p65蛋白水平差异无统计学意义外(P>0.05),其余指标差异均有统计学意义(均P <0.05).(4)DM组上述指标与模型组比较,仅IL-1β水平和磷酸化IκBα蛋白水平显著减少,其余指标差异无统计学意义(均P >0.05);与假手术组相比,各指标差异均有统计学意义(均P<0.01).(5)DL组上述指标与模型组相比,差异均无统计学意义(均P>0.05);与假手术组相比,各指标差异均有统计学意义(均P<0.01). 结论 高剂量金钗石斛多糖能减轻局灶性脑缺血-再灌注大鼠脑损伤,作用机制与抑制早期NF-κB信号通路激活有关.中、低剂量金钗石斛多糖减轻局灶脑缺血-再灌注炎性脑损伤的作用不明显.

 
关键词:脑缺血-再灌注损伤;炎性反应;金钗石斛多糖;大鼠

   
   3讨论
   80%左右的缺血性卒中发生在大脑中动脉。本研究通过大鼠右侧MCAO和再通模型,模拟人类急性缺血性脑血管病后形成的局灶f生脑缺血.再灌注。星形胶质细胞和小胶质细胞是脑组织固有的免疫细胞,在局灶陛脑缺血-再灌注后,它们激活成为介导炎f生反应所需要的效应细胞,Gn心和BCl-2相关蛋白A1仅(A1)被认为分别是星形胶质细胞和小胶质细胞激活的标记物,采用RT.qPCR法检测脑组织中GFAP和A1mRNA表达水平可以反映炎性反应细胞的活化程度,而TNF一仅和IL.1B则是脑缺血发生后脑组织最重要的促炎性反应因子。本研究显示,造模成功后24h,大鼠出现明显神经功能缺损症状,脑含水量和梗死体积等脑损伤指标明显增高,与此同时,脑缺血-再灌注脑区促炎因子TNF—d和IL一1B水平以及星形胶质细胞和小胶质细胞激活标志物GFAP和A1mRNA表达水平均明显升高,支持炎性反应促进脑梗死早期病情恶化的观点,提示抗炎性反应治疗是减轻脑缺血-再灌注脑损伤的有效措施。受研究条件所限,本实验仅设立了再灌注24h一个时间点,若在实验中设立多个时间点,可进一步观察脑缺血一再灌注后炎性指标的动态变化和相应的药物干预作用的趋势。