[摘要] 背景与目的:研究证实垂体肿瘤转化基因1(pituitary tumor transforming gene 1,PTTG1) 的表达情况与各类肿瘤细胞的恶性程度有关,但是其在胶质瘤中的作用尚不清楚。本研究旨在探讨PTTG1在恶 性胶质瘤侵袭中的作用及其临床意义。方法:应用蛋白质印迹法(Western blot)检测PTTG1蛋白在不同胶质瘤 细胞系中的表达;采用小RNA质粒干扰技术抑制U87细胞中PTTG1蛋白的表达,应用Western blot技术检测转染 的效率;通过体外侵袭实验检测转染后细胞侵袭力的变化;采用Western blot技术检测经过表皮细胞生长因子 (epithelial growth factor,EGF)刺激后敲除PTTG1的细胞组(siPTTG1/U87)与转染空载的细胞组(Scr/U87) 中Akt、ARK5磷酸化的情况。结果:PTTG1蛋白在各恶性胶质瘤细胞系中均高表达;敲除PTTG1后U87细胞的侵 袭力明显下降;对Scr/U87细胞进行EGF刺激5 min后,Akt、ARK5的磷酸化情况显著增强,而无论有无EGF的刺 激,siPTTG1/U87中Akt、ARK5的磷酸化情况都没有明显改变。结论:在恶性胶质瘤细胞中,PTTG1蛋白呈高表 达状态并且与侵袭性显著相关,其对侵袭性的调控可能是通过Akt-ARK5通路实现的。  
       [关键词] 胶质瘤;侵袭;垂体肿瘤转化基因1;ARK5;siRNA
       
       3 讨  论   神经胶质瘤是人类高度恶性的肿瘤之一, 儿童和50~60岁的人群是本病的高发人群,目 前尚难以对其进行早期诊断和有效的治疗。因 胶质瘤具有高度的侵袭性,几乎不可能进行完 整的手术切除,所以常会导致患者的残疾甚至 死亡[2]。   PTTG1是于1997年发现的一种原癌基因, 在人类的睾丸和胸腺组织中高表达,在其他 的组织中低表达,并且在很多的肿瘤组织和肿 瘤细胞系中高表达。研究证明,PTTG1蛋白的 表达与神经胶质瘤的恶性程度和不良预后成正 相关。因此,本研究考虑PTTG1与胶质瘤的高 侵袭性有一定关系。本实验结果表明,成功 将PTTG1质粒转染进U87细胞后,对siPTTG1/ U87细胞和SCR/U87细胞进行体外侵袭实验。 染色后显微镜下观察,siPTTG1/U87与Scr/U87 相比镜下细胞数目明显减少。说明敲除PTTG1 后,胶质瘤细胞系U87的侵袭力显著减弱,证明 PTTG1与胶质瘤的侵袭性有影响。   ARK5作为AMPK亚家族的成员之一,是 Akt的下游信号分子[11]。有研究证明,Akt与 ARK5在肿瘤细胞的侵袭中有重要作用[12-13]。 本研究前期的研究也已经证明,ARK5影响了 胶质瘤细胞的侵袭性[9]。因此,PTTG1导致的 人恶性胶质瘤的高侵袭性可能与Akt-ARK5通路 有关。   EGF是人体内的一种活性物质,由刺激 表皮细胞生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)使酪氨酸磷酸化,促进细胞的 增值分化。EGFR是酪氨酸激酶受体,EGF与 EGFR结合后,引起下游PI3K/Akt的磷酸化激 活。本研究的前期研究表明ARK5位于Akt的下 游[9]。本研究结果显示,对SCR/U87细胞进行 EGF刺激5 min后,ARK5的磷酸化明显升高。 而对siPTTG1/U87细胞进行EGF刺激5 min后, ARK5的磷酸化并没有显著变化。说明PTTG1影 响胶质瘤细胞的侵袭性可能是通过Akt-ARK5通 路是实现的。