摘要:目的观察替莫唑胺对人脑胶质瘤细胞U251增殖、凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法取对数生长期U251细胞,分别加入0.02、0.06、0.1g/L替莫唑胺,空白对照组不加替莫唑胺,分别培养24、48、72h,MTT实验观察细胞增殖情况;取对数生长期U251细胞,加入0.06g/L替莫唑胺(0.06g/L替莫唑胺组),细胞培养48h后,用流式细胞技术测算细胞凋亡率,RT-PCR法、Westernblotting法检测存活素(Survivin)mRNA、蛋白。结果随着替莫唑胺浓度增加及作用时间延长,U251细胞增殖抑制率越高。0.06g/L替莫唑胺组细胞凋亡率为22.6%±2.3%,对照组为3.3%±1.1%,两组比较,P<0.05;0.06g/L替莫唑胺组SurvivinmRNA相对表达量为0.65±0.11,对照组为0.96±0.15,两组比较,P<0.05;0.06g/L替莫唑胺组Survivin蛋白相对表达量为0.25±0.03,对照组为0.49±0.04,两组比较,P<0.05。结论替莫唑胺能有效抑制U251细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制Survivin表达有关。
       
       关键词:替莫唑胺;人脑胶质瘤细胞U251;细胞增殖;细胞凋亡;存活素
       
       
       3讨论
       神经胶质瘤是常见的颅内原发性恶性肿瘤[11]。目前,手术是挽救神经胶质瘤患者生命及延长其生存期的主要方式,但因该肿瘤恶性程度高,呈现浸润生长,常规手术不能起到彻底清除病灶的作用,因此化疗在延长胶质瘤等[12]恶性肿瘤患者生存期方面发挥重要作用。研究发现,肿瘤内的无血管区域能够阻止药物渗透到肿瘤的中心部位。
       替莫唑胺是一种含有咪唑四嗪环的烷化剂类抗肿瘤前体药物[13]。替莫唑胺口服后可快速吸收,不需要经过肝脏代谢,生物利用度接近100%,此外其在血脑屏障中穿透力强,便于在颅内发挥细胞毒作用。文献[14]报道,替莫唑胺可以用于治疗成人顽固性多形性成胶质细胞瘤。本研究显示,替莫唑胺能有效抑制U251细胞增殖,并且莫唑胺浓度(40~80μmol/L)越高,作用时间越长(24~72h),U251细胞存活率越低。在脑胶质瘤等[15]恶性肿瘤的发病过程中,几乎都存在细胞凋亡异常。文献[16]表明,替莫唑胺能有效降低U251细胞及其干细胞中livin基因的表达,并促进细胞凋亡。本实验观察了替莫唑胺对U251细胞凋亡的影响,结果显示U251细胞经替莫唑胺干预后出现凋亡,且凋亡率明显高于对照组。证实替莫唑胺可以诱导U251细胞凋亡。