[摘要]目的 探讨 双氢青蒿素(dihydroartemisinine,DHA)对人神经胶质瘤生长的影响及机制。方法人胶质瘤U251细胞株传代培养,设置空白对照组、二甲基亚砜(DMSO)组、DAPT组和DHA(10、20、40、80μmol/L)实验组,应用CCK-8和FCM检测细胞增殖、周期及凋亡,Westernblot检测Notch1的胞内区域(NICD-1)及其下游靶蛋白Hes1的表达水平。建立裸鼠皮下胶质瘤模型(n=20),按随机数字表法分为DMSO组、DAPT组、DHA(50、100mg/kg)治疗组,每组5只,根据时间体积曲线计算各组抑瘤率,免疫组化法检测裸鼠皮下移植瘤组织中NICD-1表达水平变化。结果与空白对照组和DMSO组相比,实验组U251细胞增殖率显著下降,G1期细胞所占百分比显著上升,S期细胞所占百分比显著下降,早期凋亡率显著上升(P<0.05),NICD-1及Hes1蛋白表达水平显著低于空白对照组(P<0.05),均呈浓度依赖关系;DHA各治疗组的裸鼠皮下移植瘤生长速率及移植瘤组织内NICD-1表达显著低于DMSO对照组(P<0.05)。结论DHA有效抑制人神经胶质瘤的生长,其作用机制可能与通过下调NICD-1表达抑制Notch信号通路有关。
   
   [关键词]神经胶质瘤细胞;双氢青蒿素;Notch信号通路;NICD-1;增殖;凋亡;裸鼠
   
   3讨论
   DHA是从天然植物中提取出来的一种药物,因其突出的抗疟疾效果被全世界广泛使用,其对人体的安全性得到了广泛验证[6],并且有文献[11]报道DHA对正常细胞几乎没有影响。研究[7-10]表明DHA对多种肿瘤细胞具有突出的抗癌活性,表明DHA具有作为抗癌药物的潜在可能性。DHA可以通过二价铁介导产生的氧自由基(reactiveoxygenspecies,ROS)直接杀伤肿瘤细胞[16-18]。DHA也可以通过线粒体途径促进肿瘤细胞凋亡,外源性凋亡通路中,DHA可以减少Bcl-2等抗凋亡基因表达及增加Bax凋亡相关基因表达以促进Caspase-3等凋亡基因表达,从而激活Caspase级联反应导致凋亡[10,19-20];内源性凋亡通路中,DHA可以通过影响线粒体膜电位促进Cyt-C释放,增强Casepase-3表达,从而激活Caspase级联反应导致凋亡[7,21]。DHA还可以通过下调CyclinD1等周期蛋白阻滞肿瘤细胞增殖周期,从而抑制肿瘤增殖[19-20,22]。然而,现阶段DHA抑制肿瘤生长的信号通路机制仍不十分明确。本研究证实了DHA可以抑制人胶质瘤U251细胞增殖,促进凋亡,阻滞U251细胞周期由G1期进入S期。
   DHA可以通过影响线粒体膜电位促进Cyt-C释放,增强Casepase-3表达,从而激活Caspase级联反应导致凋亡[7,21]。DHA还可以通过下调CyclinD1等周期蛋白阻滞肿瘤细胞增殖周期,从而抑制肿瘤增殖[19-20,22]。然而,现阶段DHA抑制肿瘤生长的信号通路机制仍不十分明确。本研究证实了DHA可以抑制人胶质瘤U251细胞增殖,促进凋亡,阻滞U251细胞周期由G1期进入S期。