关键词:一抗;二抗;孵育

 

1)用一抗稀释液按合适比例稀释一抗,4℃长期保存;

2)转膜结束后,打开转膜夹用眼科镊夹出PVDF膜,PVDF膜用0.5‰TBST稍稍漂洗后,放入装有5%脱脂牛奶的盒中室温封闭1h;

3)用0.5‰TBST将膜表面的牛奶封闭液冲洗掉,用圆珠笔在膜两边标记上蛋白Marker的分子量,然后根据目的蛋白分子量大小用刀片裁剪PVDF膜,孵育对应已稀释好的一抗工作液(将膜放入装有一抗工作液的15ml离心管),4℃摇床过夜孵育(约16-19小时);

4)次日,取出PVDF膜,一抗回收放4℃冰箱重复使用;

5)膜放入装有0.5‰TBST的洗盒中水平摇床洗5min*6(每次更换新的0.5‰TBST);

6)用0.5‰TBST 将辣根酶标记的山羊抗兔/小鼠二抗按1:5000的比例稀释,将膜放入其中,室温孵育1小时;

7)0.5‰TBST洗5min*6。