永盛彩票网

您好,欢迎光临研内助! 设为首页 | 加入收藏
登 陆  |  注册    
肾脏冰冻切片免疫荧光
发布时间:2019-04-22 11:33:42| 浏览次数:
TAG: 肾脏 冰冻切片 免疫荧光

    关键词:肾脏;冰冻切片;免疫荧光

     

    组织冰冻切片、4%多聚甲醛、氯化钠、氯化钾、磷酸氢二钠、磷酸二酸钾、烧杯、量筒、磁力搅拌器、10M NaOH溶液、吐温-20、triton x-100,正常驴血清、ddH2O、组化笔、移液器、一抗、荧光素标记的二抗、DAPI (4',6-二脒基-2-苯基吲哚)、荧光防淬灭剂、洗盒、无色指甲油、盖玻片、正置荧光显微镜

    7.2 主要试剂配制

    10XPBS(磷酸盐缓冲液)母液:称取80g氯化钠、2g氯化钾、35.8g磷酸氢二钠、2g磷酸二氢钾于1000ml烧杯中,加入800ml ddH2O,磁力搅拌器混匀至溶质完全溶解,使用将10M NaOH溶液将pH值调到7.4,再用ddH2O定容至1000ml,转移到蓝色广口瓶中室温长期保存。

    0.5‰ PBST溶液:将10XPBS(PH7.4)稀释10倍至1XPBS,加0.5ml吐温-20,混匀即可使用。

    1‰ triton x-100破膜液:10ml triton x-100加到10ml ddH2O中。

    5%驴血清封闭液:50ml正常驴血清,9950ml ddH2O。

    7.3 肾脏冰冻切片免疫荧光实验步骤

    1)对于O.C.T.包埋的肾脏冰冻组织,用冰冻切片机切成5mm厚的冰冻切片,长期保存在-80℃冰箱;

    2)将冰冻切片取出,室温干燥10min(没有水汽);

    3)用组化笔沿组织周围化圈,后组织上滴加4%多聚甲醛固定10min;

    4)0.5‰ PBST洗5min*3;

    5) 1‰ triton x-100 溶液破膜15min (唯独Ki67需要步骤5和6,其余直接到步骤7);

    6)0.5‰PBST洗5min*3;

    7)5%驴血清封闭液室温封闭1h;

    8)一抗按合适比例用1XPBS(两个抗体则需如1:500 LYVE-1,1:50 Ki67混合孵育)稀释后,滴加在组织上,1XPBS作阴性对照,4℃避光孵育过夜(16h-19h);

    9)第二天切片从冰箱取出恢复至室温(约30min);

    10)0.5‰PBST洗5min*3;

    11)荧光素标记的荧光二抗用1XPBS稀释500倍(两个二抗则需如Alexa 488 驴抗兔荧光/二抗Cy3驴抗山羊荧光二抗混合孵育),二抗37℃或者室温孵育1h;

    12)0.5‰PBST洗5min*3;

    13)DAPI染核5min;

    14)0.5‰PBST洗5min*3;

    15)滴加适量荧光防淬灭剂,用盖玻片封片,盖玻片周围用无色指甲油加固防止滑动损伤组织;

    16)正置荧光显微镜拍照。

    注:4%多聚甲醛固定后防止干片;二抗孵育开始注意避光;混合孵育时两个一抗须为不同种属来源,二抗则选择不同颜色荧光素标记的。 


 
 
 上一篇:肾脏石蜡切片Masson染色
 下一篇:肾脏组织蛋白提取
研内助医学论文
最新资讯 >

文献求助
友情链接
  • 浙江不锈钢管厂家
  • 上海skf轴承经销商
  • 游泳池水处理设备
  • 美容仪器
  • 塑料焊接机
  • 电子布氏硬度计
  • 数控卷板机
  • 南京花园设计
  • 粉皮机厂家
首页关于我们医学资讯科研服务服务优势加入我们医学课件文献求助

15minweb.com 研内助生物科技有限公司  

  云顶彩票网15minweb.com版权所有

 粤IPC备18128004号

【研内助】郑重声明:本网站资源、信息来源于网络,完全免费共享,仅供学习和研究使用,版权和著作权归原作者所有,如有不愿意被转载的情况,请通知我们删除已转载的信息。
研内助发布此信息目的在于传播更多信息,与本网站立场无关。研内助不保证该信息(包括但不限于文字、数据及图表)准确性、真实性、完整性等。

020-29879549 早上:09:00-12:30
下午:14:00-18:00
友情链接:盛源彩票官网  大通彩票  盛源彩票官网  大通彩票官网  大通彩票  大通彩票官网  盛源彩票官网  

免责声明: 本站资料及图片来源互联网文章,本网不承担任何由内容信息所引起的争议和法律责任。所有作品版权归原创作者所有,与本站立场无关,如用户分享不慎侵犯了您的权益,请联系我们告知,我们将做删除处理!