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提取样本总RNA
发布时间:2019-04-10 12:01:08| 浏览次数:
TAG: 提取 样本 RNA

    关键词:提取;样本;RNA

    2.7.1.1 根据样品重量,向样品中加入RNAAiso Plus,每50mg 加入1ml,并完全覆盖样品,通过反复吸打使样品匀浆,室温静置5 分钟

    2.7.1.2 4℃,以12,000 转/分的速度离心5 分钟,将上清转移至新的离心管(1.5ml)中以每1ml RNAAiso Plus 加入200ul 氯仿的比例向上清中加入氯仿,盖好管盖后剧烈震荡15 秒,直至溶液充分混匀乳化,无分相现象,室温放置5 分钟

    2.7.1.3 4℃,以12,000 转/分的速度离心15 分钟,可见样品分为三层:红色有机相,中间层和无色水相,小心将上层水相转移到一个新的离心管中,避免移走中间的蛋白质层。

    2.7.1.4 向离心管中加入等体积异丙醇,上下颠倒数次,混合均匀。室温静置10 分钟后,4℃,以12,000 转/分的速度离心10 分钟,离心管底部可观察到少量的白色沉淀

    2.7.1.5 小心移除上清,确保白色沉淀留在管底。加入1ml、-20℃预冷的75%乙醇(无RNA 酶的去离子水配制,RNase-Free Water),上下颠倒以清洗沉淀

    2.7.1.6 4℃,以12,000 转/分的速度离心5 分钟,用移液枪小心吸去上清,避免吸走沉淀。离心管口向上,保持开放状态,室温放置干燥5-10分钟。

    2.7.1.7 用无RNA 酶的去离子水(RNase Free H2O)溶解沉淀,溶解后的RNA 可立刻用于下一步反应。如果RNA 不能立刻应用,将RNA 溶液置于-80℃冰箱中保存备用


 
 
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