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线粒体膜电位检测试验
发布时间:2019-04-08 10:22:42| 浏览次数:
TAG: 线粒体 膜电位

    关键词:线粒体;膜电位

     

    应用荧光探针JC-1检测DATS处理后的骨肉瘤细胞MG63和MNNG/HOS的线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,am)变化,观察DATS对骨肉瘤细胞线粒体膜电位水平的影响。jc-1是一种常用于检测线粒体膜电位的理想荧光探针,在线粒体膜电位较高时,jc-1聚集在线粒体基质,形成聚合物,488nm激发时的最大发射波长590nm,可以产生红色荧光:在线粒体膜电位较低时,JC一1不能聚集在线粒体基质中,此时jc一1为单体,488nm激发时最大发射波长527nm,可以产生绿色荧光。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例[28]。主要步骤如下:

    (1)将骨肉瘤细胞MG63和MNNG/HOS分别接种于6孔培养板,细胞密度为2×105个/2 ml/孔,培养过夜待其贴壁。

    (2)去除原培养基,分别加入2ml含DATS(40 u M)或DATS+NAC(5 mM的培养基,常规孵育24小时。

    (3)刺激结束后常规消化离心细胞,用冷PBS洗涤细胞2次。

    (4)用500 u l JC-1染色工作液重悬细胞,37。C 5%CO:孵箱中孵育15分钟。

    (5)离心收集细胞,用500 u l预热的孵育缓冲液重悬细胞。

    (6)流式细胞仪检测荧光强度。FlowJo软件分析细胞线粒体膜电位水平变化。

     


 
 
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