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活性氧检测试验
发布时间:2019-04-08 10:22:21| 浏览次数:
TAG: 活性氧

    关键词:活性氧

     

    应用荧光探针DCFH-DA观察荧光显微镜下细胞内绿色荧光强度水平,分析DATS诱导MG63和MNNG/HOS细胞内ROS变化水平。DCFH—DA无荧光,能透过细胞膜进入细胞后被酯酶水解为DCFH。当ROS存在时DCFH被氧化为不能透过细胞膜且可发出绿色荧光的DCF,荧光强度与细胞内ROS水平成正比。主要步骤如下:

    (1)将对数期生长的骨肉瘤细胞MG63和MNNG/HOS分别接种于6孔培养板,细胞密度为2×10 4个/2 ml/孑L,培养过夜待其贴壁。

    (2)去除原培养基,分别加入2ml含不同浓度DATS的培养基(0,20,40,80 p M),分别孵育不同时间4,8,16,24小时。在部分分组中,用NAC 5mM预处理细胞2小时后,加入DATS共同处理细胞。

    (3)刺激结束后加入2 u l DCFH—DA溶液,使其终浓度为10 u M,37。C避光孵育30分钟。

    (4)除去培养基并用PBS漂洗2次,荧光显微镜下观察绿色荧光强度。激发波长488nm,发射波长530nm。ImageJ软件分析荧光强度水平。


 
 
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